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出版者:Amer Society for Microbiology

作者:Young, Steven A. 編

出品人:

頁數:623

译者:

出版時間:

價格:$ 124.24

裝幀:HRD

isbn號碼:9781555811730

叢書系列:

圖書標籤:

• 臨床病毒學
• 病毒檢測
• 實驗室診斷
• 醫學微生物學
• 傳染病
• 病毒學
• 臨床醫學
• 診斷技術
• 醫學檢驗
• 病毒感染

《臨床病毒學手冊》 內容詳盡，實踐導嚮的病毒學檢測與診斷指南 引言 病毒感染是全球範圍內重大的公共衛生挑戰，其診斷的及時性和準確性直接關係到患者的治療效果、疾病的防控以及公共衛生體係的穩定。在復雜的臨床環境中，可靠的病毒學檢測方法是識彆病原體、指導臨床決策、監控疫情傳播的關鍵。《臨床病毒學手冊》 應運而生，旨在為臨床實驗室技術人員、病毒學傢、感染科醫生、公共衛生專傢以及相關科研人員提供一本內容全麵、技術詳實、操作規範的實踐指南。本書並非理論的堆砌，而是聚焦於臨床病毒學檢測的實際應用，涵蓋瞭從樣本采集、處理到各種主流檢測技術的原理、流程、結果判讀以及質量控製等方方麵麵，力求將復雜的病毒學知識轉化為實驗室中切實可行的操作步驟和判斷依據。 第一部分：臨床病毒學檢測的基礎 本部分為理解和執行後續檢測技術奠定堅實基礎，深入闡述瞭病毒學檢測在臨床中的重要性、常見病毒的分類與緻病性，以及樣本采集、保存和運輸的關鍵要素。 第一章：臨床病毒學的重要性與發展 1.1 病毒感染的公共衛生意義： 詳細闡述病毒感染對人類健康造成的巨大威脅，迴顧曆史上的重大病毒疫情（如天花、脊髓灰質炎、HIV、SARS、H1N1流感、埃博拉、COVID-19等），分析病毒感染的傳播模式、緻病機製和對社會經濟造成的深遠影響。強調早期準確診斷在控製疫情蔓延、減輕疾病負擔中的決定性作用。 1.2 病毒學檢測在臨床決策中的角色： 探討病毒學檢測如何支持臨床診斷，區分細菌、真菌或其他病原體的感染，鑒彆病毒性疾病的亞型，預測疾病的嚴重程度，評估治療效果，以及指導抗病毒藥物的選擇與使用。 1.3 病毒學檢測技術的演進與發展趨勢： 概述病毒學檢測技術從傳統的細胞培養、血清學方法，發展到現代的分子生物學技術（如PCR、測序）和免疫學技術（如ELISA、化學發光），並展望未來在快速診斷、高通量檢測、個體化醫療等方麵的最新發展方嚮，如基於微流控芯片的檢測、基因組學和宏基因組學在病毒溯源與發現中的應用。 第二章：常見臨床重要病毒概覽 2.1 呼吸道病毒： 詳細介紹流感病毒（甲、乙、丙型）、副流感病毒、呼吸道閤胞病毒（RSV）、腺病毒、鼻病毒、冠狀病毒（包括SARS-CoV、MERS-CoV、SARS-CoV-2）、人偏肺病毒等。闡述其流行季節、傳播途徑、典型臨床錶現、易感人群及潛在的並發癥。 2.2 腸道病毒： 覆蓋腸道病毒71型（EV71）、柯薩奇病毒、埃可病毒、輪狀病毒、諾如病毒、甲型肝炎病毒（HAV）、戊型肝炎病毒（HEV）等。分析其糞-口傳播途徑，常見的胃腸道癥狀，以及在兒童和成人中的緻病特點。 2.3 血液傳播與性傳播病毒： 深入探討人類免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、單純皰疹病毒（HSV）、巨細胞病毒（CMV）、人類乳頭瘤病毒（HPV）、梅毒螺鏇體（雖然不是病毒，但常與病毒檢測一同考慮，此處可提及）等。闡述其傳播方式、潛伏期、慢性感染的風險以及對宿主造成的長期健康影響。 2.4 蟲媒傳播病毒： 介紹登革病毒、寨卡病毒、西尼羅河病毒、蜱傳腦炎病毒等。分析其通過蚊蟲、蜱蟲等媒介傳播的特點，地域分布，以及引起的相關熱帶病和地方病。 2.5 其他重要病毒： 包含水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）、麻疹病毒、風疹病毒、腮腺炎病毒、狂犬病病毒等。討論其傳播方式，典型臨床錶現，疫苗接種的重要性以及在人群中的流行情況。 第三章：樣本采集、處理與保存 3.1 樣本類型的選擇與采集注意事項： 詳細指導針對不同病毒檢測，應選擇何種樣本類型（如血液、血清、血漿、尿液、唾液、咽拭子、鼻咽拭子、糞便、腦脊液、組織標本、傷口分泌物、羊水等）。強調無菌操作、避免交叉汙染、采集時機（如病毒復製活躍期、抗體産生期）的重要性。 3.2 樣本處理的規範流程： 講解樣本從采集到送檢前的預處理步驟，包括離心、分裝、核酸提取前的準備等。針對不同樣本類型，提供具體的處理方案，以確保樣本質量和檢測的靈敏度。 3.3 樣本的保存與運輸： 闡述樣本在不同溫度（冷藏、冷凍）下的保存要求，以及不同運輸方式（如乾冰、冷藏包）下的注意事項，以防止病毒降解或汙染。強調樣本鏈的完整性，是保證檢測結果可靠性的基礎。 第二部分：分子生物學檢測技術 本部分重點介紹當前臨床病毒學檢測中最核心、最靈敏的技術——分子生物學方法，包括不同類型的核酸擴增技術和基因測序技術。 第四章：核酸提取與純化 4.1 核酸提取原理： 詳細介紹基於矽膠膜、磁珠、酚-氯仿等不同原理的核酸提取方法。解釋其關鍵步驟，如裂解、吸附、洗脫，以及如何優化提取效率和純度。 4.2 不同樣本類型的核酸提取方案： 針對血液、血清、細胞、組織、拭子、糞便等不同樣本基質，提供詳細的核酸提取操作指南，包括試劑選擇、體積配比、孵育時間、離心速度等參數的優化。 4.3 核酸質量控製： 介紹評估提取核酸質量的方法，如A260/A280比值、瓊脂糖凝膠電泳，以及如何避免提取過程中引入的抑製劑，這些抑製劑可能影響後續的PCR反應。 第五章：聚閤酶鏈式反應（PCR）及其衍生技術 5.1 PCR技術原理： 深入解析DNA聚閤酶鏈式反應的基本原理，包括變性、退火、延伸三個關鍵步驟，以及引物設計、dNTPs、Taq酶等關鍵組分的作用。 5.2 定量PCR（qPCR/Real-time PCR）： 5.2.1 qPCR原理與優勢： 講解熒光染料法（如SYBR Green）和TaqMan探針法的工作原理，以及實時監測熒光信號，實現對病毒核酸定量的優勢。 5.2.2 qPCR體係優化與參數設置： 提供詳細的qPCR引物/探針設計原則，模闆用量，循環參數（退火溫度、延伸時間、循環次數）的優化，以及內參基因的選擇（對於RNA病毒，需要考慮逆轉錄效率）。 5.2.3 結果判讀與定量方法： 講解Ct值（Cycle threshold）的意義，如何通過標準麯綫進行絕對定量和相對定量，以及如何設置陽性/陰性閾值。 5.3 多重PCR（Multiplex PCR）： 5.3.1 多重PCR原理與應用： 介紹一次PCR反應中同時擴增多個靶基因的原理，以及其在同時檢測多種病毒（如呼吸道病原體組閤）或區分不同病毒株方麵的應用。 5.3.2 多重PCR體係設計與優化： 強調引物對設計、兼容性、反應條件優化，以及如何避免引物二聚體和非特異性擴增。 5.4 反轉錄-PCR（RT-PCR）： 5.4.1 RT-PCR原理： 講解如何利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄為cDNA，再進行PCR擴增。詳細說明一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR的差異與優缺點。 5.4.2 RT-qPCR在RNA病毒檢測中的應用： 重點介紹RT-qPCR在流感病毒、新冠病毒、HIV、HBV、HCV等RNA病毒檢測中的核心地位，以及其高靈敏度和特異性。 5.5 其他分子生物學技術簡介： 5.5.1 等溫擴增技術（如LAMP）： 簡述LAMP技術在無需精密控溫設備下實現快速擴增的特點，及其在快速篩查和基層應用中的潛力。 5.5.2 核酸重組酶聚閤酶鏈式反應（RPA）： 介紹RPA技術在室溫條件下快速擴增的優勢，適用於快速現場檢測。 第六章：基因測序技術在病毒學中的應用 6.1 DNA測序技術迴顧： 簡要迴顧Sanger測序技術的基本原理。 6.2 新一代測序（NGS）技術： 6.2.1 NGS原理與技術平颱： 介紹Illumina、Ion Torrent等主流NGS平颱的測序原理、數據生成方式。 6.2.2 病毒基因組測序與鑒定： 闡述如何利用NGS對未知病毒進行全基因組測序，鑒定病毒種類，以及對已知病毒進行耐藥基因突變檢測。 6.2.3 病毒變異與進化研究： 解釋NGS在追蹤病毒變異株（如新冠病毒的Delta、Omicron變異株）、研究病毒進化機製、評估疫苗有效性方麵的關鍵作用。 6.2.4 宏基因組測序在病毒發現中的應用： 介紹無需預先設計引物的宏基因組測序技術，如何在復雜樣本（如環境樣本、病人體液）中發現新的病毒或非典型病毒感染。 6.3 測序數據的分析與解讀： 簡述病毒序列比對、基因組組裝、突變位點檢測、係統發育分析等基本數據分析流程。 第三部分：免疫學與血清學檢測技術 本部分聚焦於檢測病毒引起的宿主免疫應答，以及利用抗原-抗體反應進行病毒檢測的方法，包括傳統血清學和現代免疫學方法。 第七章：血清學檢測技術 7.1 抗體檢測原理： 解釋檢測血液中是否存在針對特定病毒的IgM、IgG抗體的原理，以及IgM（急性感染）和IgG（既往感染或免疫）的臨床意義。 7.2 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）： 7.2.1 ELISA原理與類型： 詳細介紹直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA等不同類型的ELISA，以及其操作流程、顯色反應和結果判讀。 7.2.2 臨床應用： 講解ELISA在HBV、HCV、HIV、HAV、HEV等病毒抗體檢測中的廣泛應用，以及其作為大規模篩查方法的優勢。 7.3 免疫層析試驗（膠體金法/試紙條法）： 7.3.1 原理與操作： 介紹基於側嚮層析原理的快速診斷試紙條，如COVID-19抗原/抗體檢測、流感病毒抗原檢測等。強調其快速、簡便、易於操作的特點。 7.3.2 結果判讀與局限性： 指導如何判讀試紙條結果，並分析其可能存在的假陽性、假陰性及檢測靈敏度的限製。 7.4 其他血清學方法： 簡要介紹補體結閤試驗、間接熒光抗體試驗（IFA）、中和試驗等傳統或特殊用途的血清學檢測方法。 第八章：現代免疫學檢測技術 8.1 化學發光免疫分析法（CLIA）： 8.1.1 CLIA原理與優勢： 闡述利用化學發光物質標記抗體或抗原，通過檢測發光信號進行定量的原理。強調其高靈敏度、高特異性、自動化程度高等優點。 8.1.2 臨床應用： 介紹CLIA在HBV e抗原、HIV抗體/抗原聯閤檢測、TORCH組閤檢測等方麵的應用。 8.2 免疫熒光法（IF）： 8.2.1 IF原理與技術： 講解利用熒光標記抗體與靶抗原結閤，通過熒光顯微鏡觀察熒光的原理。區分直接免疫熒光和間接免疫熒光。 8.2.2 臨床應用： 介紹IF在HSV、VZV、CMV等病毒抗原檢測，以及在快速診斷中的應用。 8.3 免疫組化（IHC）： 8.3.1 IHC原理與步驟： 闡述在組織切片中利用抗體檢測病毒抗原的原理，以及其固定的、透化、封閉、孵育抗體、顯色等步驟。 8.3.2 臨床應用： 介紹IHC在檢測組織樣本中的病毒感染，如CMV、HPV、HBV等，並有助於區分感染竈的細胞類型。 第四部分：細胞學與病毒分離 本部分介紹傳統的病毒學檢測方法，雖然在臨床應用中逐漸被分子方法取代，但在某些情況下仍具有重要價值。 第九章：細胞培養與病毒分離 9.1 細胞培養基礎： 介紹不同類型細胞係（如Vero細胞、HeLa細胞、MDCK細胞）的培養基、培養條件、傳代方法。 9.2 病毒分離流程： 詳細指導樣本處理、接種細胞、誘導細胞病變（CPE）觀察、病毒鑒定（如血清學鑒定、PCR鑒定）等步驟。 9.3 細胞病變觀察與鑒定： 描述不同病毒在細胞培養中引起的典型細胞病變形態，以及如何通過血清學方法（如間接免疫熒光）或分子方法（如PCR）對分離到的病毒進行鑒定。 9.4 病毒分離在臨床診斷中的意義與局限性： 探討病毒分離在獲得活病毒用於後續研究（如疫苗開發）、耐藥性分析、或在分子方法敏感性不足時的重要性，以及其耗時長、技術要求高等局限性。 第十章：其他傳統病毒學檢測方法 10.1 電子顯微鏡檢查： 介紹電子顯微鏡（如透射電鏡）在形態學上直接觀察病毒顆粒的原理，及其在未知病毒發現和特定病毒鑒定中的作用。 10.2 病毒學診斷的生物安全要求： 強調在進行病毒分離、培養以及處理高緻病性病毒樣本時，嚴格遵守生物安全防護等級（BSL）和相關操作規程的重要性。 第五部分：質量控製、數據管理與倫理考量 本部分關注病毒學檢測的規範化、標準化以及倫理問題。 第十一章：質量控製與質量保證 11.1 實驗室內部質量控製（IQC）： 介紹每日、每周、每月進行的質控樣本檢測，包括陽性對照、陰性對照、標準品等，以監控檢測過程的穩定性。 11.2 外部質量評估（EQA）： 講解參與國傢或地區組織的室間質評項目，以評估實驗室檢測結果的準確性和可比性。 11.3 試劑與儀器校準： 強調定期對試劑盒、儀器設備（如PCR儀、離心機、移液器）進行校準和維護的重要性。 11.4 結果復核與偏差處理： 建立完善的結果復核機製，對異常結果進行追溯和調查，並采取糾正措施。 第十二章：數據管理與報告 12.1 檢測報告的書寫規範： 指導如何撰寫準確、清晰、完整的病毒學檢測報告，包括樣本信息、檢測方法、結果、參考範圍、報告日期、報告醫生簽名等。 12.2 LIMS係統在病毒學實驗室的應用： 介紹實驗室信息管理係統（LIMS）如何幫助實現樣本追蹤、數據存儲、結果查詢、報告生成等自動化管理。 12.3 數據解讀與臨床溝通： 強調實驗室人員與臨床醫生之間的有效溝通，共同解讀檢測結果，為患者提供最佳診療方案。 第十三章：病毒學檢測中的倫理與法律問題 13.1 患者隱私保護： 強調在處理患者樣本和檢測數據時，嚴格遵守保密原則，保護患者的個人隱私。 13.2 知情同意： 在進行某些特殊檢測（如基因測序）前，需要獲得患者的知情同意。 13.3 結果報告的準確性與責任： 探討檢測結果的準確性對患者治療和公共衛生決策的重要性，以及相關人員的法律責任。 結論 《臨床病毒學手冊》是一本集理論指導與操作實踐於一體的專業參考書。本書緊密結閤臨床需求，涵蓋瞭當前最先進、最常用的病毒學檢測技術，並對其實驗原理、操作流程、結果判讀、質量控製等方麵進行瞭詳盡的闡述。通過閱讀本書，廣大病毒學工作者能夠係統地掌握臨床病毒學檢測的各項技能，提高檢測的準確性和效率，從而在病毒性疾病的診斷、治療和防控工作中發揮更重要的作用，為守護人民健康貢獻力量。本書的編撰團隊由經驗豐富的臨床病毒學傢、分子生物學專傢和實驗室技術人員組成，確保瞭內容的科學性、權威性和實用性。我們期望本書能夠成為臨床病毒學實驗室不可或缺的工具書，並為病毒學領域的研究與發展提供有益的參考。

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