前言第1章 基因工程技術 1.1 基因工程技術基本原理與實踐 1.1.1 基因工程簡述 1.1.2 基因工程技術實踐 1.2 原核生物基因工程技術 1.2.1 目的DNA的獲得 實驗1 細菌基因組DNA的製備 實驗2 植物基因組DNA的製備和分析 實驗3 動物細胞基因組DNA的製備 實驗4 PCR擴增目的DNA 1.2.2 大腸杆菌質粒載體的製備 實驗5 堿裂解法 實驗6 小量一步提取法 實驗7 試劑盒法 1.2.3 載體和目的DNA的限製酶消化 實驗8 基因組DNA的限製酶消化 實驗9 質粒載體的限製酶消化 實驗10 DNA片段的迴收純化 1.2.4 載體與目的基因的體外重組 實驗11 載體和目的基因的體外重組 實驗12 PCR産物的TA重組 1.2.5 重組質粒導人大腸杆菌 實驗13 CaCl2介導轉化法 1.2.6 轉化菌落的篩選 實驗14 PCR法快速篩選陽性剋隆 實驗15 菌落原位雜交 1.3 真核生物(酵母)的基因工程 實驗16 酵母基因組DNA的提取 實驗17 酵母細胞質粒DNA的分離 實驗18 酵母細胞的轉化 實驗19 酵母單雜交 主要參考文獻第2章 蛋白質工程技術 2.1 蛋白質工程技術原理 2.2 蛋白質工程技術 2.2.1 重組蛋白質的錶達 實驗1 重組蛋白在大腸杆菌中的誘導錶達 實驗2 重組蛋白在酵母中的誘導錶達 2.2.2 重組錶達蛋白的分離純化 實驗3 金屬螯閤層析法純化帶組氨酸標簽的蛋白質 實驗4 榖胱甘肽-瓊脂糖親和層析純化融閤蛋白 實驗5 從包含體中純化錶達蛋白 實驗6 利用凝膠過濾層析更換緩衝液 2.2.3 蛋白質溶液的濃縮 實驗7 超濾法濃縮蛋白質溶液 實驗8 透析法濃縮蛋白溶液 2.2.4 蛋白質濃度測定 實驗9 Bradford檢測法 實驗10 Lowry檢測法 2.2.5 蛋白質鑒定方法 實驗11 蛋白質的sDSIPAGE 實驗12 雙嚮聚丙烯酰胺凝膠電泳 實驗13 蛋白質印跡 2.2.6 蛋白質的定點突變 實驗14 重疊延伸産生特異位點突變 主要參考文獻第3章 植物細胞工程技術 3.1 植物細胞工程原理 3.2 植物細胞工程技術 3.2.1 植物組織培養技術 實驗1 植物組織培養常用培養基的配製及滅菌 實驗2 煙草組織快繁技術 實驗3 植物細胞懸浮培養技術 3.2.2 植物原生質體分離與細胞融閤技術 實驗4 煙草葉片原生質體的分離與培養 3.2.3 植物體細胞雜交 實驗5 電激法誘導植物原生質體融閤 實驗6 聚乙二醇誘導植物原生質體融閤 3.2.4 植物轉基因技術 實驗7 葉盤法轉化煙草 實驗8 真空滲入法轉化擬南芥 實驗9 基因槍轉化水稻愈傷組織 3.2.5 轉基因植物的鑒定 實驗10 外源基因整閤的鑒定——斑點雜交 實驗11 利用Southern雜交檢測外源基因的整閤 實驗12 植物組織總RNA的提取 實驗13 利用RT-PCR初步檢測外源基因在植物體內的錶達 實驗14 利用實時熒光定量RT-PCR定量檢測外源基因在植物體內的錶達 實驗15 gus基因檢測 主要參考文獻第4章 動物細胞工程技術 4.1 動物細胞工程技術原理 4.2 動物細胞工程技術 4.2.1 細胞培養的準備工作及基本操作 實驗1 細胞培養的前期工作 實驗2 細胞培養基的配製 實驗3 細胞計數及活力測定 實驗4 細胞傳代培養(胰蛋白酶消化法) 實驗5 細胞的凍存和復蘇 4.2.2 原代細胞的培養 實驗6 從小鼠胚胎中分離鼠胚胎成縴維細胞 實驗7 從雞胚胎中分離背根神經節細胞 4.2.3 細胞係的建立和培養 實驗8 原代鼠胚胎成縴維細胞的永生化 實驗9 細胞係的培養 4.2.4 DNA導入哺乳動物細胞 實驗10 與磷酸鈣形成共沉澱的DNA轉染技術 實驗11 脂質體介導的DNA轉染技術 實驗12 用電穿孔法導入DNA 實驗13 運用顯微注射法導入DNA 4.2.5 檢測基因産物的錶達 實驗14 利用綠色熒光蛋白觀察特定融閤蛋白在細胞內的動態分布 實驗15 用免疫熒光技術檢測特定蛋白質在細胞中的定位 實驗16 用免疫共沉澱法和免疫印記法檢測蛋白質之間的相互作用 實驗17 用流式細胞儀分析細胞周期的變化 實驗18 利用雙螢光素酶作為報告基因來檢測啓動子的活性和調控 主要參考文獻第5章 微生物工程技術 5.1 微生物工程技術原理 5.1.1 微生物工程的定義 5.1.2 微生物工程的研究內容 5.1.3 微生物工程的發展曆史 5.1.4 發酵工業的特點 5.1.5 微生物工程的應用 5.1.6 我國發酵工業發展概況 5.2 微生物工程技術 實驗1 菌種的自然選育 實驗2 土壤中放綫菌的選擇性分離 實驗3 發酵菌株的初篩 實驗4 微生物菌種的保藏 實驗5 發酵菌種的誘變選育 實驗6 四環素的定嚮發酵及效價測定 實驗7 竹黃菌液體發酵及其活性物質的提取 實驗8 澱粉質原料的酒精發酵 實驗9 生長麯綫和産物形成麯綫的測定 實驗10 發酵過程中糖的利用 實驗11 抗生素的分離純化 實驗12 發酵汙染的檢測和判斷 實驗13 酸乳的發酵 主要參考文獻
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