分子诊断学实验指导

分子诊断学实验指导 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

出版者:
作者:高基民
出品人:
页数:117
译者:
出版时间:2010-2
价格:16.00元
装帧:
isbn号码:9787506745345
丛书系列:
图书标签:
  • 分子诊断学
  • 医学检验
  • 实验指导
  • 生物技术
  • 分子生物学
  • 临床医学
  • 诊断技术
  • 实验室
  • 医学教育
  • 生物化学
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具体描述

《全国高等医药院校医学检验专业规划教材•分子诊断学实验指导》是全国高等医药院校医学检验专业规划教材之一,是《分子诊断学》第2版的配套教材。全书分9章,共33个实验。按核酸的分离与纯化、聚合酶链反应、核酸鉴定与分析、基因工程综合实验和其他相关分子诊断技术顺序编写,实验内容涵盖最基本的分子生物学操作技术、常用的分子生物学实验技术及分子生物学技术在临床医学检验中的应用实验技术,尚有部分较为实用的分子检验技术在附录中详细介绍。

《全国高等医药院校医学检验专业规划教材:分子诊断学实验指导》可供高等院校医学本科、专科学生实验使用,也可供教师及从事临床检验工作和医学研究的技术人员参考使用。

分子诊断学实验指导:深入理解与实践的桥梁 本书旨在为分子生物学、医学检验、生物技术及相关领域的学习者提供一套系统、全面、深入的实验指导。它不仅是一本操作手册,更是一本引导读者理解分子诊断学核心原理、掌握关键实验技能、并能独立设计与分析实验的综合性教材。 本书的独特价值在于其内容结构的严谨性与实验设计的实用性。我们摒弃了过于冗长和理论化的叙述,将重点聚焦于“如何做”和“为什么这么做”的结合,确保读者在动手实践的过程中,同步建立起扎实的理论基础。 --- 第一部分:分子生物学基础技术的回顾与精炼 分子诊断学的基石在于对核酸(DNA和RNA)和蛋白质的精准检测与分析。本部分内容对支撑分子诊断的经典和现代基础技术进行了精炼和强化,确保读者具备进行高级实验所需的前置技能。 一、核酸的提取、纯化与定量 精准的起始是成功诊断的前提。本章详细阐述了从不同样本类型(血液、组织、细胞、微生物等)中高效、高纯度提取核酸的方法。 1. 裂解技术的多样性比较: 深入探讨了机械裂解、化学裂解和酶促裂解的适用性与效率差异,特别关注对易降解样本(如游离DNA/RNA)的处理策略。 2. 固相萃取技术的优化: 详细指导如何利用硅胶膜或磁珠技术进行自动化或半自动化的核酸纯化,包括缓冲液体系(高盐、低盐、洗脱液)的配比优化,以适应下游不同灵敏度要求。 3. 核酸质量与数量的评估: 不仅限于使用分光光度计进行A260/A280的粗略评估,更侧重于使用荧光定量(如PicoGreen或Qubit系统)进行精确计量,并讲解了电泳和毛细管电泳(CE)在评估完整性中的作用。 二、核酸的体外扩增技术(PCR家族详解) 聚合酶链式反应(PCR)是分子诊断的“引擎”。本部分将PCR技术提升到应用层面,强调其优化与故障排除。 1. 标准与实时荧光定量PCR (qPCR) 的深度解析: 引物与探针的设计原则: 详细讲解了Tm值、二级结构抑制、二聚体形成预防等关键设计参数,并引入了在线工具的使用指南。 反应体系的组分调控: 深入分析了不同Taq酶的特性(如热稳定性、保真性)、dNTPs浓度、Mg2+浓度的优化对扩增效率和特异性的影响。 数据分析与标准曲线的建立: 强调了Ct值的可靠性判定、扩增效率的计算($E=10^{(-1/slope)}-1$)以及如何处理稀有突变和低拷贝模板的定量挑战。 2. 高保真与非等温扩增技术简介: 简要介绍(侧重原理和应用场景)如逆转录PCR (RT-PCR)、数字PCR (dPCR) 在绝对定量中的优势,以及LAMP等快速等温扩增技术在现场检测中的潜力。 --- 第二部分:分子诊断学的核心应用技术与策略 本部分是本书的重点,它将基础技术与临床和科研的实际需求紧密结合,指导读者掌握诊断性实验的构建与执行。 三、分子杂交与原位检测技术 虽然高通量测序和qPCR占据主导地位,但分子杂交技术在特定场景下依然是不可替代的金标准。 1. Southern/Northern Blotting 的优化: 详细演示如何选择合适的探针类型(放射性、生物素化、荧光标记),如何进行高灵敏度的信号捕获和背景抑制,特别是在检测低丰度基因表达或基因结构变异时的应用。 2. 荧光原位杂交 (FISH) 的实验流程: 重点讲解了探针的标记、细胞/组织预处理(固定、去钙化、去甲醇)、杂交条件的控制(温度、时间)以及信号共定位分析,用于染色体数目异常和基因重排的检测。 四、高通量测序(NGS)的实验准备与质控 随着二代测序技术成为主流,掌握测序文库的制备成为分子诊断实验室的核心技能。 1. 文库构建的理论与实践: 片段化技术的选择: 酶切法与超声波破碎的对比,以及片段大小的选择对不同应用(如全基因组、外显子组、靶向捕获)的影响。 接头(Adapter)的连接与PCR扩增: 详细指导如何确保接头的高效连接,如何通过Barcode(索引序列)设计实现多重(Multiplexing)检测,以及如何控制PCR循环数以避免PCR偏好性(Bias)。 2. 文库的质控与定量: 强调使用高分辨熔解曲线分析(如TapeStation或Bioanalyzer)来评估文库片段分布的均匀性,并使用qPCR对有效文库浓度进行精确测定,这是保证测序产出质量的关键步骤。 --- 第三部分:数据解读、质量控制与常见问题解析 分子诊断的最终价值体现在对数据的准确解读上。本部分侧重于实验结果的分析、报告的撰写以及质量保障体系的建立。 五、分子诊断数据的分析与可视化 1. 变异检测与注释: 针对测序数据,指导读者使用主流的生物信息学工具(如BWA, GATK)进行比对、变异 calling(SNV, Indel),并讲解如何利用公共数据库(如ClinVar, dbSNP)对发现的变异进行临床意义的初步分级。 2. 定量结果的临床相关性判断: 针对qPCR或dPCR结果,指导读者如何设置合理的阳性阈值、阴性对照的判定标准,以及如何处理抑制剂对结果造成的影响。 六、质量控制(QC)与实验室规范 高质量的诊断依赖于严格的内外部质量控制。 1. 建立全流程质控点: 从样本接收、核酸提取、扩增反应到结果判读的每一个环节应设置的监控指标(如NTC、IPC、阳性对照)。 2. 污染的预防与控制: 详细阐述了物理隔离、试剂管理、防污染试剂(如UDG/UNG系统)的使用,以及如何通过设计无目标基因的引物或探针来检测实验体系的交叉污染。 3. 标准操作规程(SOP)的撰写与执行: 提供了一套构建规范化SOP的模板和关键要素,确保实验的可重复性和可追溯性。 通过本书的学习,读者将不仅掌握分子诊断实验的“技术动作”,更能理解其背后的科学逻辑和临床意义,从而成为能够独立解决复杂分子检测问题的专业人才。

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读后感

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用户评价

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作为工具书,图表的质量和信息密度至关重要,而这本书在这方面表现得极为出色。插图和表格的设计不仅数量多,更重要的是质量极高。它们不是简单地重复文字描述,而是以一种视觉化的方式,将抽象的概念具象化,将繁琐的数据系统化。例如,在介绍某一特定分析流程时,书中提供的流程图简洁明了,每一步的逻辑分支都清晰可见,即便是不熟悉该流程的读者,也能通过图示迅速建立起全局认知。此外,书中引用的数据和案例似乎都经过了严格的筛选和核实,具有很高的时效性和权威性。这种对视觉辅助材料的高标准要求,使得阅读体验得到了质的飞跃——它将原本需要花费大量时间去理解和构建的思维模型,通过一张精美的图表瞬间被清晰地呈现出来。这对于需要快速掌握和复习知识点的学习者来说,无疑是巨大的福音。

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初次翻阅时,我立刻被其中严谨的逻辑结构所吸引。作者在内容组织上显然下了很大功夫,从基础理论的铺陈到实验操作的细化,过渡自然流畅,几乎没有生涩的跳跃感。每一个章节的引入都像是为后续内容搭建了一座坚实的桥梁,让人能够顺理而上,逐步深入到更复杂的知识点。特别是那些涉及到理论推导和数据分析的部分,作者的处理方式非常到位,他们没有停留在概念的简单罗列,而是深入剖析了背后的科学原理,并辅以清晰的数学模型或逻辑框架进行解释。这对于我这种希望不仅仅停留在“会做实验”层面,更想“理解实验本质”的读者来说,简直是宝藏。书中的章节标题也设计得十分精炼,一眼就能看出该部分的核心内容,极大地提高了检索效率。这种对知识体系建构的重视,让整本书读起来脉络清晰,知识点之间相互关联,形成了一个有机的整体,而不是零散信息的堆砌。

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这本书的封面设计简洁大气,色彩搭配沉稳,一看就是那种内容扎实、严谨的学术著作。我尤其喜欢它封面上使用的字体,既有古典的厚重感,又不失现代的清晰度,让人联想到那些经过时间沉淀的经典教材。拿到手里,纸张的手感也相当不错,厚实而光滑,即使是经常翻阅也应该能保持良好的状态。内页的排版更是体现了编辑团队的用心,图文的布局错落有致,重点突出,阅读起来非常舒适。那些复杂的流程图和示意图,如果排版不佳,很容易让人望而却步,但这本书的处理方式非常巧妙,即使是初次接触这些领域的人,也能迅速抓住关键步骤。整体而言,这本书从外到内都散发着一种专业和可靠的气息,让人对即将展开的学习之旅充满期待。它不仅仅是一本工具书,更像是一个值得信赖的伙伴,安静地伫立在书架上,随时准备为你提供支持和指引。这种对细节的关注,往往是判断一本优秀教材的重要标准。

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这本书给我的最深印象是它所蕴含的广阔视野和前瞻性。虽然它是一本指导手册,但它显然没有局限于介绍既有的、成熟的实验技术。在许多章节的结尾,都能看到对新兴技术趋势的探讨和对未来研究方向的展望。这种将基础知识与前沿动态紧密结合的处理方式,极大地拓宽了读者的知识边界,让人在掌握“现在”的技术的同时,也能对“未来”的发展方向有所预判和准备。它鼓励读者不仅仅是成为一个合格的实验操作者,更要成为一个具有批判性思维和创新潜力的研究人员。这种激励人心的内容设置,让我在阅读过程中总能保持一种积极探索的热情。这本书成功地架设了从“学习”到“创新”的桥梁,使读者能够站在坚实的基础之上,眺望更远的学术山巅。

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这本书的语言风格可以说是教科书级别的典范——精准、客观,却又不失温度。它完全摒脱了那种故作高深的晦涩难懂,而是用一种非常平实且富有条理性的笔触来阐述复杂的科学概念。在描述实验步骤时,作者的用词精确到了毫厘之间,每一个动词的选择都仿佛在脑海中勾勒出了精确的操作场景,读起来让人感觉仿佛有经验丰富的导师在一旁耳提面命。我特别欣赏那些在关键操作点旁添加的“注意事项”或“常见错误分析”部分,这些往往是普通教材中容易被忽略但对实际操作至关重要的细节。它们的存在,极大地降低了初学者在实际操作中可能遇到的挫败感,也体现了编著者深厚的实践经验。这种既有理论深度又有实操指导的平衡感,让这本书不仅仅是理论指导,更像是一份经过无数次失败检验后沉淀下来的“实战手册”。

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