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出版者:Humana Press

作者:Liu, X. Johne (EDT)

出品人:

页数:489

译者:

出版时间:2005-12-13

价格:USD 189.00

装帧:Hardcover

isbn号码:9781588293626

丛书系列:

图书标签:

非洲爪蟾
分子生物学
细胞生物学
发育生物学
实验方案
生物技术
基因组学
蛋白质组学
再生医学
模式生物

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具体描述

A collection of standard and cutting-edge techniques for using Xenopus oocytes and oocytes/egg extracts to reconstitute biological and cellular processes. These readily reproducible methods take advantage of the oocyte's impressive protein abundance, its striking protein translation capacity, and its breathtaking possibilities for the assembly of infectious viral particles by single cell injection of multiple RNAs. The authors focus on the versatility of frog oocytes and egg extracts in cell biology and signal transduction, and cover all the major uses of oocytes/extracts as experimental models.

《细胞培养与分子生物学技术：从基础到前沿》本书聚焦于现代生物医学研究的核心技术，深入剖析细胞生物学、分子生物学以及生物化学领域中最为关键和实用的实验操作流程与理论基础。旨在为生命科学领域的研究生、博士后、技术人员及相关行业的专业人士提供一本全面、详尽且具有高度实践指导意义的参考手册。本书结构严谨，内容涵盖了从基础的无菌操作规范到尖端的基因编辑技术等一系列复杂流程的精确指导。我们摒弃了过于宽泛的概述，力求提供每一步骤的详细参数、潜在的陷阱分析以及故障排除的最佳实践。 --- 第一部分：现代细胞培养的艺术与科学本部分是理解所有体内外研究的基础，重点强调了细胞环境的精确控制与维持。第一章：无菌操作与细胞培养环境的建立本章详述了生物安全柜（BSC）的正确使用、层流罩的维护、培养箱（CO2、O2、湿度）的校准标准。详细介绍了不同级别（BSL-1至BSL-3）实验室的安全规程与个人防护装备（PPE）的选择标准。关键内容包括：培养基的无菌配制、添加剂（如血清、抗生素）的筛选与灭活处理，以及培养基的pH值监控与缓冲能力分析。第二章：原代细胞的分离与培养本章专注于从组织中获取和培养初始细胞系的技术。详细描述了器官块培养法、酶消化的原理与应用，重点分析了不同组织（如肝脏、肾脏、皮肤或神经组织）的特异性消化方案。讨论了爬行（Adherence）与悬浮（Suspension）细胞的培养基优化策略，包括血清替代品的选择（如ITS、B27/N2补充剂）和首次传代的精确计算方法。第三章：稳定细胞系的建立、维持与鉴定本节深入探讨了永生化细胞系的长期维护。内容包括：细胞代数（Passage Number）对细胞表型的影响、细胞克隆选择的集落形成实验（Clonogenic Assay）的步骤优化。鉴定方面，详细介绍了细胞的形态学鉴定、支原体（Mycoplasma）的检测（荧光染色法与PCR法），以及核型分析（Karyotyping）在确保细胞系稳定性中的作用。第四章：细胞功能学分析与实时监测本章侧重于细胞活力和功能的定量评估。包括标准的MTT、CCK-8、LDH释放和细胞凋亡（Annexin V/PI）的流式细胞术（FACS）分析流程。此外，还引入了实时细胞分析（如xCELLigence系统）的原理与数据解读，以及细胞增殖（BrdU/EdU标记）的检测方法。 --- 第二部分：分子生物学核心技术精要本部分涵盖了从遗传物质提取到基因表达调控研究的全部关键步骤。第五章：核酸的提取、纯化与定量本章对比了硅胶柱法、苯酚-氯仿抽提法在DNA和RNA提取中的优劣势。针对不同来源（血液、组织、FFPE蜡块）的样本，提供了详细的优化方案。关键技术点包括：RNase污染的预防、高分子量DNA的提取、微量核酸的纯化效率评估，以及使用Nanodrop和Qubit进行精确定量的标准操作流程。第六章：聚合酶链式反应（PCR）及其衍生技术本章详述了标准PCR、定量实时PCR（qPCR）和逆转录PCR（RT-PCR）的理论基础和实践细节。详细讲解了引物/探针的设计原则（Tm值、二聚体抑制）、热循环程序的优化，以及在qPCR中如何进行绝对定量和相对定量（ΔΔCt法）的数据分析。特别收录了数字PCR（dPCR）在罕见事件检测中的应用。第七章：分子克隆学与载体构建本章是基因操作的基石。详细介绍了限制性内切酶的酶切反应条件、DNA的连接反应（Ligation）优化，以及高效的细菌转化和筛选方法。载体构建方面，重点阐述了传统粘性末端连接、Gibson组装、以及限制酶/连接酶独立克隆（LIC）技术的具体操作指南。第八章：蛋白质的表达、纯化与表征本部分从基因表达的层面过渡到功能性蛋白质的获取。涵盖了大肠杆菌异源表达系统（原核表达）的优化（诱导时机、共表达伴侣、包涵体复性）；酵母及哺乳动物细胞表达系统的适用性分析。蛋白质纯化方面，详细介绍了亲和层析（如His-tag, GST-tag）、离子交换层析和分子筛层析的操作流程，以及SDS-PAGE、Western Blotting和ELISA的应用。 --- 第三部分：前沿技术与高级应用本部分聚焦于当前生命科学研究中最具颠覆性的技术，并提供详细的实践指南。第九章：基因编辑技术：CRISPR/Cas9系统本章是当前基因功能研究的核心。详细解析了Cas9核酸酶的机制、gRNA的设计策略（脱靶效应的预测与规避）。实践部分涵盖了：体外转染/电穿孔递送系统的选择、同源重组修复（HDR）与非同源末端连接（NHEJ）的效率比较。同时，深入探讨了Prime Editing和Base Editing等“下一代”编辑工具的原理与操作。第十章：高通量测序准备与数据解读（NGS Prep）本章侧重于为下一代测序平台准备高质量的文库。包括：全基因组测序（WGS）、外显子组测序（WES）和RNA测序（RNA-Seq）的文库构建流程对比。重点讲解了质量控制（TapeStation/Bioanalyzer）的重要性，以及如何从原始测序数据（FASTQ文件）开始，进行初步的质量过滤和比对分析。第十一章：免疫沉淀与蛋白质相互作用研究本章围绕蛋白质复合物的解析展开。详细介绍了免疫共沉淀（Co-IP）的试剂选择（抗体、磁珠/琼脂糖珠）、洗脱条件优化，以及如何通过Western Blotting验证蛋白质间的直接或间接相互作用。此外，还涵盖了更精细的技术，如亲和纯化、蛋白质相互作用组学（PPI）的研究设计。第十二章：组织学与成像技术基础本章关注样本的可视化分析。包括石蜡包埋、切片制作、H&E染色等基础组织学流程。在免疫组化（IHC）和免疫荧光（IF）方面，详细分析了抗原修复（热修复/酶修复）的必要性、一抗/二抗的稀释度优化，以及荧光信号的串扰（Crosstalk）避免。高级成像部分，介绍了共聚焦显微镜（Confocal Microscopy）的三维重建原理与荧光漂白（Photobleaching）的应对策略。 --- 本书的特色：本书的每一章节都设计了“常见问题与解决”（Troubleshooting）模块，旨在将理论知识转化为可执行的实验步骤，帮助研究人员有效避免和解决实验过程中遇到的复杂技术难题。我们力求以详尽的图表、精确的试剂配方和严谨的实验逻辑，成为实验室中不可或缺的“操作指南”。