The ELISA Guidebook

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出版者:
作者:Crowther, John R.
出品人:
页数:566
译者:
出版时间:
价格:$ 145.77
装帧:
isbn号码:9781603272537
丛书系列:
图书标签:
  • ELISA
  • 免疫学
  • 生物技术
  • 实验指南
  • 蛋白质检测
  • 抗体
  • 酶联免疫吸附试验
  • 实验室技术
  • 生物化学
  • 免疫分析
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具体描述

The Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) continues, as predicted, to be the predominant assay used in biomedical and agricultural research. While little has changed in the principles of the ELISAs used since the publication of The ELISA Guidebook, many technological advantages, including the increasing number of reagents available for exploitation and the larger spectrum of instruments to measure the coloured products of ELISAs, have greatly benefited the field. Other testing technologies using molecular techniques, predominantly the conventional and more and more often, real time PCR, are rapidly evolving to help diagnose and differentiate disease agents and identify substances present in exquisitely small amounts. The ELISA is still needed either alone in mass screening, such as serological assays, or used in tandem with molecular techniques to fully evaluate the molecular and antigenic nature of analytes. John R. Crowther provides todaya (TM)s premier practical guide to the understanding and application of ELISA. This Edition enlarges on charting methods for assessing the indirect ELISA, ruggedness and robustness of tests, aspects of kit use and validation, and internal quality control and external quality management of data. The author describes each method in great detail to ensure experimental success and includes advice on equipment choice, maintenance, and calibration. Wherever possible, helpful written explanations are provided along with copious diagrams. With its numerous worked examples, detailed instructions, and extensive illustrations, The ELISA Guidebook, Second Edition offers a powerful synthesis of all the basic concepts and practical experimental details investigators need to understand, develop, and apply ELISA methodology successfully in day-to-day basic and clinical research.

好的,这是一份关于一本假设名为《The ELISA Guidebook》的图书的详细简介,内容不涉及原书的任何具体信息,专注于描述一个可能存在的、关于酶联免疫吸附试验(ELISA)的综合性参考指南的内容结构和价值。 --- 《免疫分析技术:酶联免疫吸附试验实用指南》 本书简介 《免疫分析技术:酶联免疫吸附试验实用指南》是一本全面、深入且高度实用的技术手册,旨在为生物医学研究人员、临床实验室技术人员以及相关领域的学生提供一套结构化、可操作的知识体系,涵盖酶联免疫吸附试验(ELISA)从基础原理到高级应用的每一个关键环节。本书着重于提供理论背景与实际操作指南的完美结合,确保读者不仅理解“为何”这样做,更能精确掌握“如何”实施高质量、可重复的实验。 第一部分:ELISA的基础构建模块 本部分为ELISA技术的理论基石,详细阐述了该技术背后的核心免疫学和生物化学原理。 免疫学基础回顾: 深入探讨抗原与抗体的相互作用动力学、特异性与亲和力的测量方法。这部分内容回顾了免疫球蛋白的结构、分类及其在检测系统中的作用,为后续的试剂选择和实验设计打下坚实基础。 酶联反应的原理与应用: 详细解析了酶催化底物产生信号的机制。重点介绍了辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)作为最常用标记物的酶学特性、最佳反应条件以及终止反应的方法。同时,探讨了荧光素酶等新型酶系统的应用潜力。 包被技术与表面化学: 深入分析了微孔板表面修饰的必要性。比较了物理吸附、共价偶联等不同包被方法的优缺点,并详细介绍了如何优化蛋白质(如抗体、抗原)在聚苯乙烯或特殊涂层板上的稳定性和均匀性。 信号检测与定量分析: 全面介绍比色法、荧光法和化学发光法的检测原理。书中提供了详细的曲线拟合方法,包括四参数逻辑曲线(4PL)拟合的数学基础,并指导读者如何评估和报告测定限(LOD)、定量限(LOQ)及线性范围。 第二部分:核心实验设计与方法学优化 本部分是本书的实践核心,聚焦于实验设计的严谨性与方法学的细致优化,是确保实验结果可靠性的关键。 ELISA类型的选择与适配: 系统梳理了直接法、间接法、夹心法(双抗体夹心法)和竞争性ELISA(包括间接竞争法和直接竞争法)的适用场景。通过决策树模型,指导用户根据目标分析物(小分子、蛋白质、激素等)的性质选择最优方案。 试剂的筛选与优化: 提供了针对关键试剂(一抗、二抗、捕获抗体、检测抗体)的质量控制标准。详述了抗体滴定的重要性,包括如何通过预实验确定最佳包被浓度、封闭液配方以及初级和次级抗体的工作稀释度,以最小化非特异性吸附和背景噪音。 样本处理的挑战与对策: 详细讨论了血清、血浆、唾液、尿液及细胞培养上清液等不同生物样本的处理流程。特别关注了基质效应(Matrix Effect)的识别与消除,例如如何使用适当的稀释液缓冲体系来缓冲样本中干扰因子的影响。 微孔板的孵育与洗涤策略: 强调了孵育温度、时间对反应动力学的影响。对洗涤步骤进行了深入解析,对比了手动洗涤、自动化洗板机的使用技巧,并阐述了如何通过优化洗涤次数和缓冲液盐浓度来平衡回收率和背景信号。 第三部分:质量保证、验证与故障排除 本部分面向需要将ELISA应用于临床诊断或严格监管环境的研究人员,提供了从实验室内控到方法学全面验证的指导。 内部质量控制(IQC)与外部质量评估(EQA): 介绍了建立内部质控标准的操作流程,包括使用高、中、低三个浓度水平的质控品来监测批次间的变异性。同时,指导实验室如何参与并解读外部评估计划的结果。 方法学性能验证: 遵循国际公认的验证标准(如CLSI指南),系统讲解了ELISA方法的性能评估参数: 灵敏度: 准确测定方法的LOD和LOQ。 特异性: 评估交叉反应性,确保检测的纯度。 精密度: 分析重复性和批内、批间差异(CV%)。 准确度: 通过加标回收实验评估恢复率。 线性与范围: 确认测定范围内的准确性和线性关系。 高级故障排除指南: 本章以图表形式总结了常见实验问题及其系统性解决方案: 高背景信号(High Background): 诊断封闭不足、抗体交叉反应或洗涤不充分。 信号过低或无信号(Low/No Signal): 检查酶活性、底物新鲜度或抗原/抗体活性。 数据波动大(High Variability): 排除操作一致性问题、温控不佳或试剂批次差异。 第四部分:新兴应用与高级技术整合 本部分展望了ELISA技术的前沿发展,以及如何将传统ELISA与其他技术平台结合以解决更复杂的生物学问题。 高通量与微阵列ELISA(Array-ELISA): 介绍了将ELISA原理应用于微流控芯片和多重分析平台的技术,如何在单个样本中同时检测多个分析物,极大地提高了通量和效率。 ELISA与其他技术的联用: 探讨了如何将ELISA与质谱技术(MS)结合进行靶向验证,以及与免疫组织化学(IHC)的协同应用,以弥补单一技术在样本信息上的不足。 便携式与即时检验(POCT)的未来: 讨论了ELISA向现场快速检测领域发展的趋势,包括基于纸基的检测平台(Paper-based ELISA)的原理和商业化挑战。 目标读者 本书面向所有在生命科学研究、药物开发、疫苗效价测定、疾病诊断和环境监测领域中需要依赖免疫分析技术的人员。无论是初入实验室的研究生、需要优化现有SOP的资深技术员,还是负责方法验证的质量控制经理,都能从中找到量身定制的实用指导。 本书特色 本书结构清晰,采用“理论解释—操作步骤—常见问题与解决”的模块化设计。书中包含大量实验记录模板、流程图和优化建议清单,强调了实验的可重复性和数据质量的重要性,是实验室案头不可或缺的权威参考书。

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